Loss of CtIP results in DSB repair

Loss of CtIP results in DSB repair defect
HRR-mediated DSB repair is carried out in a series of steps, the first step is nucleolytic processing, which generates 3’ single-stranded DNA (ssDNA) tails to initiate strand invasion [28, 29]. The 3’ single-stranded stretch of DNA is coated with a single-strand binding protein known as replication protein A (RPA), which is in turn displaced by RAD51 [30]. CtIP is reported to initiate 5’-strand end resection to generate 3’-overhang, which is required for the effective formation of the RPA-ssDNA complex [14]. This was further supported by a result from GSEA analysis of human breast cancers (Supplemental Fig. 2A), showing that at least 50% of the gene sets were associated with DNA damage response and repair. Detection of γH2AX has been suggested as a highly specific and sensitive marker for monitoring DSB damage and resolution [31]. Therefore, we quantified γH2AX foci formation after CtIP knockdown (Fig. 2A). As shown in Figure 2B and 2C, one hour after IR, the number of γH2AX foci was almost the same as at an early time point, but rather higher 24 hr later in CtIP-depleted MCF cells, when compared to control MCF7 cells, which suggested that the efficiency of DSB repair was reduced when CtIP was dysfunctional. Further, we checked HRR efficiency by checking Rad51 foci, and we found that in CtIP-depleted MCF cells, the number of Rad51 foci was significantly reduced 3 hrs after 4 Gy irradiation (Fig. 2D and 2E). These observations suggest that without CtIP, DNA end resection is blocked and DSBs cannot be repaired precisely and effectively by HRR.

Результаты (русский) 2:

Потеря результатов CTIP в DSB ремонта дефектной
HRR-опосредованной ремонта DSB осуществляется в несколько этапов, первый шаг нуклеолитические обработки, который генерирует одноцепочечной ДНК 3 '(оцДНК) хвосты, чтобы инициировать нити вторжение [28, 29] , 3'одноцепочечной участок ДНК покрыта одножильному связывающего белка, известного как белок репликации A (РПА), которая, в свою очередь, вытесненной RAD51 [30]. CTIP сообщается инициировать 5'-конец нити резекцию генерировать 3'-навес, который необходим для эффективного формирования РПА-одноцепочечной ДНК комплекса [14]. Это дополнительно подтверждается результате из GSEA анализа рака молочной железы человека (Справочная рис. 2а), показывающие, что, по крайней мере 50% из наборов генов были связаны с ответом и ремонта повреждений ДНК. Обнаружение γH2AX был предложен в качестве весьма специфической и чувствительной маркера для мониторинга DSB повреждения и разрешение [31]. Таким образом, мы количественно образование γH2AX очагов после нокдауна CTIP (рис. 2А). Как показано на фиг.2В и 2С, через час после ИК, количество γH2AX очагов было почти таким же, как на ранней временной точке, а скорее выше 24 ч позже CTIP-истощенных MCF клеток, по сравнению с контрольными клетками MCF7, которые Предполагается, что эффективность ремонта DSB была снижена, когда CTIP был неблагополучных. Кроме того, мы проверили эффективность HRR путем проверки Rad51 очаги, и мы обнаружили, что в CTIP-истощенных клеток MCF, количество очагов Rad51 была значительно снижена 3 часа после 4 Гр облучения (рис. 2D и 2E). Эти наблюдения позволяют предположить, что без CTIP, конец ДНК резекция блокируется и ДР не могут быть восстановлены точно и эффективно HRR.

Результаты (русский) 3:

потери ctip результаты в DSB ремонт дефект
hrr посредником оус ремонт осуществляется ряд мер, первый шаг - это nucleolytic обработки, который генерирует 3 "единого оказались днк (ssdna) хвосты инициировать Strand вторжения [28].3 "единого оказались участок днк, покрытые прядь белок, связывающий известен как репликативный белок (рпа)который, в свою очередь, перемещенных в результате rad51 [30].ctip сообщается начать 5 '- странд конец резекция генерировать 3 "- навес, который необходим для эффективного становления пар ssdna сложных [14].это подтверждено результатом gsea анализа прав рак молочной железы (дополнительные диаграмма 2а),о том, что, по меньшей мере, 50% этого гена наборы были связаны с повреждение днк ответ и ремонта.обнаружения гамма h2ax было предложено в качестве весьма конкретных и важных для мониторинга оус ущерб и резолюции [31].поэтому мы количественно гамма h2ax очагов формирования после ctip бросовым (диаграмма 2а).как показано на диаграмме 2 b) и 2 с), через час после ик,количество гамма h2ax очагов было почти так же, как и на раннем этапе, а более 24 ч позднее в ctip обедненный мдс клетки, по сравнению с контролем mcf7 клеток, которые свидетельствуют о том, что эффективность оус ремонт был сокращен, когда ctip была недееспособной.кроме того, мы проверили hrr эффективности путем проверки rad51 очагов, и мы обнаружили, что в ctip обедненный мдс клеток,число rad51 очагов удалось существенно сократить 3 часов после 4 гр облучения (рис. 2 - х и 2e).эти замечания свидетельствуют о том, что без ctip, днк - конец резекция блокируется и dsbs нельзя ремонтировать точно и эффективно hrr.