Figure 3: Loss of CtIP causes cells

Figure 3: Loss of CtIP causes cells to be sensitive to PARP inhibitor. A. PARP inhibitor showed augmented DSB DNA damage in CtIP-depleted MCF7 cells. Two μM of olaparib were added to wild-type MCF7 cells and CtIP-depleted MCF7 cells and cultured for 16 hrs. Cells were then fixed and immunostained with γH2AX antibodies. Scale bar, 10 μm. B. Quantification of γH2AX foci in Figure 3A. Numbers of γH2AX foci were quantified from triplicated experiments (>50 cells at each condition) and are shown as mean values ± SEM. Significance was calculated by one-way analysis of variance (ANOVA) ( * for P

Результаты (русский) 1:

Рисунок 3: Потеря CtIP вызывает клетки быть чувствительным к АБС битор PARP. A. PARP ингибитор показал дополненной ДГЖД ДНК повреждения в исчерпаны CtIP MCF7 клеток. Два мкм olaparib были добавлены одичал тип MCF7 клетки и клетки истощены CtIP MCF7 и культивировали для 16 часов. Клетки были затем фиксированной и immunostained с γH2AX антител. Линейки, 10 мкм. Б. Количественная оценка очагов γH2AX на рисунке 3A. Число очагов γH2AX были количественно из triplicated экспериментов (> 50 клеток на каждое условие) и представлены как средние значения ± SEM. значимость была рассчитана путем односторонний дисперсионный анализ (ANOVA) (* для P < 0,05; ** для P < 0.01; где не указано, значение P был выше, чем 0,05). C. клетки инкубировали с различных концентраций olaparib и veliparib, и жизнеспособность клеток определяется CCK пробирного 96 часов позже. Диаграмме значения являются средними значениями ± SEM от трех независимых экспериментов. D. нокдаун CtIP уменьшает образование колонии после лечения АБС битор PARP в MCF7 клетках (слева, olaparib, право, veliparib). Формирования колонии была проведена в трех экземплярах и выживаемость рассчитывается как означает значений ± SEM. Обшивка эффективность NC и siCtIP был 75 ± 2% и 67 ± 2%, соответственно для левой olaparib граф. Обшивка эффективность NC и siCtIP был 85 ± 3% и 60 ± 4%, соответственно для графа правой veliparib. E. transfected Вестерн-блот анализ 53BP1 в клеточных экстрактов из MCF7 клеток с 53BP1, 53BP1/CtIP или управления siRNA за 48 часов. F. потеря 53BP1 спасает формирования колонии в исчерпаны CtIP MCF7 клеток после лечения с olaparib АБС битор PARP. Диаграмме значения являются средними значениями ± SEM от трех независимых экспериментов. Обшивка эффективность NC, siCtIP, si53BP1 и siCtIP/53BP1 был 95 ± 2%, 80 ± 2%, 46 ± 3% и 50 ± 4%, соответственно.CtIP потери приводит к повышенной чувствительности АБС битор PARP в естественных условияхЧтобы оценить терапевтический эффект olaparib на CtIP истощенных клеток в естественных условиях, мы исследовали способность подавлять рост опухоли клеток линии производные ксенотрансплантата обедненного CtIP MCF7 olaparib. MCF7 или CtIP обедненного MCF7 клеток подкожно были привиты к обнаженной мышей Balb/c. Через два дня после пересадки, мышей лечили ежедневно с olaparib или транспортное средство. В день 3 olaparib лечение две группы (siControl (чёрная линия) и siCtIP (фиолетовая линия)) показал немного ниже роста, по сравнению с группой без лечения olaparib (siControl (зеленая линия) и siCtIP (красная линия)), хотя она не была статистически значимой (рис. 4A). Это снижение роста могло быть вызвано эффект olaparib, как мы отмечали, что эффективность покрытия был слегка сократилось с 75% до 67% в присутствии olaparib как описано в 3D легенда рис.. Шестнадцать дней после лечения, olaparib вызвал ясно и статистически значимых ингибирующее влияние на объем опухоли в CtIP обедненного MCF7 ксенотрасплантатов (рис. 4A и 4B). Опухоль вес был ксенотрасплантатов гораздо меньше в olaparib лечение CtIP обедненного MCF7, когда по сравнению с транспортного средства лечения или других групп на день 16 (рис. 4В). В этот период мы отметили, что в эксперименте ксенотрансплантата, каждый из режимов лечения было одинаково хорошо переносится, с ни одна из мышей, показывая значительные изменения в массы тела (рис. 4C).

Результаты (русский) 2:

Рисунок 3: Потеря CTIP заставляет клетки чувствительны к ингибитору PARP. А. ингибитор ПАРП показал дополненной DSB повреждение ДНК в CTIP истощенных клеток MCF7. Два мкМ olaparib были добавлены MCF7 клетках дикого типа и CTIP-истощенных клеток MCF7 и культивировали в течение 16 часов. Клетки затем фиксировали и иммунологически окрашивали антителами с γH2AX. Масштаб бар, 10 мкм. Б. Количественное γH2AX очаги на рисунке 3А. Число γH2AX очагов были количественно с утроенный экспериментов (> 50 клеток в каждом состоянии) и показаны как средние значения ± SEM. Значение было рассчитано с помощью одного дисперсионного анализа (ANOVA) (* для р <0,05; ** для P <0,01; где не указано, значение Р была выше, чем 0,05). C. Клетки инкубировали с различными концентрациями olaparib и veliparib и жизнеспособность клеток определяли с помощью анализа CCK 96 часов позже. Нанесены значения представляют собой средние значения ± SEM из трех независимых экспериментов. Д. Нокдаун CTIP уменьшает образование колонии после лечения ингибитором PARP в клетках MCF7 (слева, olaparib, справа, veliparib). Образование колоний проводили в трех повторностях и выживаемость рассчитывают как средние значения ± SEM. Эффективность покрытия НК и siCtIP был 75 ± 2% и 67 ± 2%, соответственно для левого olaparib графике. Обшивки эффективность NC и siCtIP был 85 ± 3% и 60 ± 4%, соответственно, для правой veliparib графике. Е. Вестерн-блот анализ 53BP1 в целых клеточных экстрактах из MCF7 клеток, трансфицированных 53BP1,53BP1 / CTIP или контролировать миРНК в течение 48 часов. Ф. Потеря 53BP1 спасает образование колоний в CTIP истощенных клеток MCF7 после лечения с ингибитором PARP olaparib. Нанесены значения представляют собой средние значения ± SEM из трех независимых экспериментов. Эффективность обшивка NC, siCtIP, si53BP1 и siCtIP / 53BP1 было 95 ± 2%, 80 ± 2%, 46 ± 3%, и 50 ± 4%, соответственно.
CTIP результаты потери в повышенной чувствительности ингибитора PARP в естественных условиях
Чтобы оценить терапевтический эффект olaparib на CTIP истощенных клеток в естественных условиях, мы исследовали способность olaparib подавлять рост клеточной CTIP обедненного MCF7 линии, полученной опухоли ксенотрансплантата. MCF7 или CTIP-истощенные клетки MCF7 подкожно привитые в BALB / C голых мышей. Через два дня после трансплантации мышей ежедневно обрабатывали olaparib или транспортного средства. В 3-й день, olaparib лечение две группы (siControl (черная линия) и siCtIP (фиолетовый линия)) показал несколько более низкий рост, по сравнению с группой без лечения olaparib (siControl (зеленая линия) и siCtIP (красная линия)), хотя это не было статистически значимым (рис. 4А). Это привело к уменьшению роста может быть связано с эффектом olaparib, как мы наблюдали, что эффективность покрытий слегка уменьшилась с 75% до 67% в присутствии olaparib как показано на фиг. 3D легенда. Через шестнадцать дней после обработки, olaparib вызвало четко и место статистически значимый ингибирующий эффект на объем опухоли в CTIP-истощенных MCF7 ксенотрансплантатов (рис. 4А и 4В). Вес опухоли была значительно меньше в olaparib обработанных CTIP-истощенных MCF7 ксенотрансплантатов, по сравнению с обработкой транспортного средства или других групп на 16-й день (фиг. 4В). В течение этого периода, мы заметили, что в эксперименте ксенотрансплантата, каждый из режимов лечения была одинаково хорошо переносится, ни с одной из мышей, показывающих значительные изменения в веса (фиг.4С).

Результаты (русский) 3:

рис. 3: потеря ctip причин клетки с учетом PARP.а. PARP показал увеличить оус повреждение днк в ctip обедненный mcf7 клеток.два мкм из olaparib были добавлены в wild-type mcf7 клеток и ctip обедненный mcf7 клеток и воспитанным на 16 часов.клетки были затем стационарных и immunostained с гамма h2ax антитела.масштаб, 10 мкм. б. количественная оценка гамма h2ax очагов в схеме 3а.количество гамма h2ax очага были количественно из triplicated экспериментов (> 50 камер на каждом состоянии) и показали, как средние значения ± мдж.значение рассчитывается путем одностороннего анализа разница (результаты да) (* p < 0,05; * * п < 0,01; если не указано, что P стоимость превышает 0,05).с. клеток привел различных концентраций olaparib и veliparib,и жизнеспособность клеток определяется CCK пробирного 96 часов позже.на ценности являются средние значения ± SEM от трех независимых экспериментов.D. их из ctip снижает образование после колонии PARP обращения в mcf7 клеток (слева, olaparib; право, veliparib).колонии порода была проведена в трех экземплярах и выживаемость рассчитывается как среднее значение ± мдж.в обшивке эффективности нк и sictip было 75 ± 2% и 67 ± 2%, соответственно, на левой olaparib график.для повышения эффективности этой нк и sictip было 85 ± 3% и 60 + 4% соответственно за право veliparib график.западная пятном анализ 53bp1 в целом камеру выдержки из mcf7 клетки transfected с 53bp1,53bp1 / ctip или контроля sirna за 48 часов.ф.потери 53bp1 спасает колонии формирования в ctip обедненный mcf7 клетки после обращения с olaparib PARP.на ценности являются средние значения ± SEM от трех независимых экспериментов.для эффективности в нк, sictip, si53bp1, и sictip / 53bp1 было 95 ± 2%, 80 ± 2%, 46 ± 3%, а 50 ± 4%.
ctip потери, является увеличение PARP чувствительность in vivo
для оценки терапевтического эффекта от olaparib по ctip обедненный клетки in vivo, мы изучили способности olaparib подавлять рост более ctip обедненный mcf7 клеточной линии, полученных xenograft опухоль.mcf7 или ctip обедненный mcf7 клетки были subcutaneously пересадили в BALB / c голой мыши.через два дня после трансплантации, мыши обращаются ежедневно с olaparib или транспортного средства.на третий день,olaparib рассматриваются две группы (sicontrol (черная линия) и sictip (фиолетовой линии)) имеет несколько более низкие темпы роста по сравнению с группой без olaparib обращения (sicontrol (зеленая линия) и sictip (красная линия), хотя она не является статистически значимым (рис. 4).это сокращение роста можно за счет olaparib,