Figure 3: Loss of CtIP causes cells

Figure 3: Loss of CtIP causes cells to be sensitive to PARP inhibitor. A. PARP inhibitor showed augmented DSB DNA damage in CtIP-depleted MCF7 cells. Two μM of olaparib were added to wild-type MCF7 cells and CtIP-depleted MCF7 cells and cultured for 16 hrs. Cells were then fixed and immunostained with γH2AX antibodies. Scale bar, 10 μm. B. Quantification of γH2AX foci in Figure 3A. Numbers of γH2AX foci were quantified from triplicated experiments (>50 cells at each condition) and are shown as mean values ± SEM. Significance was calculated by one-way analysis of variance (ANOVA) ( * for P

Результаты (русский) 1:

Рисунок 3: Потеря CtIP вызывает клетки быть чувствительным к АБС битор PARP. A. PARP ингибитор показал дополненной ДГЖД ДНК повреждения в исчерпаны CtIP MCF7 клеток. Два мкм olaparib были добавлены одичал тип MCF7 клетки и клетки истощены CtIP MCF7 и культивировали для 16 часов. Клетки были затем фиксированной и immunostained с γH2AX антител. Линейки, 10 мкм. Б. Количественная оценка очагов γH2AX на рисунке 3A. Число очагов γH2AX были количественно из triplicated экспериментов (> 50 клеток на каждое условие) и представлены как средние значения ± SEM. значимость была рассчитана путем односторонний дисперсионный анализ (ANOVA) (* для P < 0,05; ** для P < 0.01; где не указано, значение P был выше, чем 0,05). C. клетки инкубировали с различных концентраций olaparib и veliparib, и жизнеспособность клеток определяется CCK пробирного 96 часов позже. Диаграмме значения являются средними значениями ± SEM от трех независимых экспериментов. D. нокдаун CtIP уменьшает образование колонии после лечения АБС битор PARP в MCF7 клетках (слева, olaparib, право, veliparib). Формирования колонии была проведена в трех экземплярах и выживаемость рассчитывается как означает значений ± SEM. Обшивка эффективность NC и siCtIP был 75 ± 2% и 67 ± 2%, соответственно для левой olaparib граф. Обшивка эффективность NC и siCtIP был 85 ± 3% и 60 ± 4%, соответственно для графа правой veliparib. E. transfected Вестерн-блот анализ 53BP1 в клеточных экстрактов из MCF7 клеток с 53BP1, 53BP1/CtIP или управления siRNA за 48 часов. F. потеря 53BP1 спасает формирования колонии в исчерпаны CtIP MCF7 клеток после лечения с olaparib АБС битор PARP. Диаграмме значения являются средними значениями ± SEM от трех независимых экспериментов. Обшивка эффективность NC, siCtIP, si53BP1 и siCtIP/53BP1 был 95 ± 2%, 80 ± 2%, 46 ± 3% и 50 ± 4%, соответственно.CtIP loss results in increased PARP inhibitor sensitivity in vivoTo assess the therapeutic effect of olaparib on CtIP-depleted cells in vivo, we investigated the ability of olaparib to suppress the growth of a CtIP-depleted MCF7 cell line-derived xenograft tumor. MCF7 or CtIP-depleted MCF7 cells were subcutaneously grafted into Balb/c nude mice. Two days after transplantation, mice were treated daily with olaparib or a vehicle. At day 3, olaparib treated two groups (siControl (black line) and siCtIP (violet line)) showed a slightly lower growth, compared to the group without olaparib treatment (siControl (green line) and siCtIP (red line)), although it was not statistically significant (Fig. 4A). This decreased growth could be due to the effect of olaparib, as we observed that the plating efficiency was slightly decreased from 75% to 67 % in the presence of olaparib as described in Fig. 3D legend. Sixteen days after treatment, olaparib caused a clearly and statistically significant inhibitory effect on tumor volume in CtIP-depleted MCF7 xenografts (Fig. 4A and 4B). The tumor weight was much less in olaparib-treated CtIP-depleted MCF7 xenografts, when compared to vehicle treatment or other groups on day 16 (Fig. 4B). During this period, we noted that in the xenograft experiment, each of the treatment regimes was equally well tolerated, with none of the mice showing significant changes in bodyweight (Fig 4C).

Результаты (русский) 2:

Рисунок 3: Потеря CTIP заставляет клетки чувствительны к ингибитору PARP. А. ингибитор ПАРП показал дополненной DSB повреждение ДНК в CTIP истощенных клеток MCF7. Два мкМ olaparib были добавлены MCF7 клетках дикого типа и CTIP-истощенных клеток MCF7 и культивировали в течение 16 часов. Клетки затем фиксировали и иммунологически окрашивали антителами с γH2AX. Масштаб бар, 10 мкм. Б. Количественное γH2AX очаги на рисунке 3А. Число γH2AX очагов были количественно с утроенный экспериментов (> 50 клеток в каждом состоянии) и показаны как средние значения ± SEM. Значение было рассчитано с помощью одного дисперсионного анализа (ANOVA) (* для р <0,05; ** для P <0,01; где не указано, значение Р была выше, чем 0,05). C. Клетки инкубировали с различными концентрациями olaparib и veliparib и жизнеспособность клеток определяли с помощью анализа CCK 96 часов позже. Нанесены значения представляют собой средние значения ± SEM из трех независимых экспериментов. Д. Нокдаун CTIP уменьшает образование колонии после лечения ингибитором PARP в клетках MCF7 (слева, olaparib, справа, veliparib). Образование колоний проводили в трех повторностях и выживаемость рассчитывают как средние значения ± SEM. Эффективность покрытия НК и siCtIP был 75 ± 2% и 67 ± 2%, соответственно для левого olaparib графике. Обшивки эффективность NC и siCtIP был 85 ± 3% и 60 ± 4%, соответственно, для правой veliparib графике. Е. Вестерн-блот анализ 53BP1 в целых клеточных экстрактах из MCF7 клеток, трансфицированных 53BP1,53BP1 / CTIP или контролировать миРНК в течение 48 часов. Ф. Потеря 53BP1 спасает образование колоний в CTIP истощенных клеток MCF7 после лечения с ингибитором PARP olaparib. Нанесены значения представляют собой средние значения ± SEM из трех независимых экспериментов. Эффективность обшивка NC, siCtIP, si53BP1 и siCtIP / 53BP1 было 95 ± 2%, 80 ± 2%, 46 ± 3%, и 50 ± 4%, соответственно.
CTIP результаты потери в повышенной чувствительности ингибитора PARP в естественных условиях
Чтобы оценить терапевтический эффект olaparib на CTIP истощенных клеток в естественных условиях, мы исследовали способность olaparib подавлять рост клеточной CTIP обедненного MCF7 линии, полученной опухоли ксенотрансплантата. MCF7 или CTIP-истощенные клетки MCF7 подкожно привитые в BALB / C голых мышей. Через два дня после трансплантации мышей ежедневно обрабатывали olaparib или транспортного средства. В 3-й день, olaparib лечение две группы (siControl (черная линия) и siCtIP (фиолетовый линия)) показал несколько более низкий рост, по сравнению с группой без лечения olaparib (siControl (зеленая линия) и siCtIP (красная линия)), хотя это не было статистически значимым (рис. 4А). Это привело к уменьшению роста может быть связано с эффектом olaparib, как мы наблюдали, что эффективность покрытий слегка уменьшилась с 75% до 67% в присутствии olaparib как показано на фиг. 3D легенда. Через шестнадцать дней после обработки, olaparib вызвало четко и место статистически значимый ингибирующий эффект на объем опухоли в CTIP-истощенных MCF7 ксенотрансплантатов (рис. 4А и 4В). Вес опухоли была значительно меньше в olaparib обработанных CTIP-истощенных MCF7 ксенотрансплантатов, по сравнению с обработкой транспортного средства или других групп на 16-й день (фиг. 4В). В течение этого периода, мы заметили, что в эксперименте ксенотрансплантата, каждый из режимов лечения была одинаково хорошо переносится, ни с одной из мышей, показывающих значительные изменения в веса (фиг.4С).

Результаты (русский) 3:

рис. 3: потеря ctip причин клетки с учетом PARP.а. PARP показал увеличить оус повреждение днк в ctip обедненный mcf7 клеток.два мкм из olaparib были добавлены в wild-type mcf7 клеток и ctip обедненный mcf7 клеток и воспитанным на 16 часов.клетки были затем стационарных и immunostained с гамма h2ax антитела.масштаб, 10 мкм. б. количественная оценка гамма h2ax очагов в схеме 3а.количество гамма h2ax очага были количественно из triplicated экспериментов (> 50 камер на каждом состоянии) и показали, как средние значения ± мдж.значение рассчитывается путем одностороннего анализа разница (результаты да) (* p < 0,05; * * п < 0,01; если не указано, что P стоимость превышает 0,05).с. клеток привел различных концентраций olaparib и veliparib,и жизнеспособность клеток определяется CCK пробирного 96 часов позже.на ценности являются средние значения ± SEM от трех независимых экспериментов.D. их из ctip снижает образование после колонии PARP обращения в mcf7 клеток (слева, olaparib; право, veliparib).колонии порода была проведена в трех экземплярах и выживаемость рассчитывается как среднее значение ± мдж.в обшивке эффективности нк и sictip было 75 ± 2% и 67 ± 2%, соответственно, на левой olaparib график.для повышения эффективности этой нк и sictip было 85 ± 3% и 60 + 4% соответственно за право veliparib график.западная пятном анализ 53bp1 в целом камеру выдержки из mcf7 клетки transfected с 53bp1,53bp1 / ctip или контроля sirna за 48 часов.ф.потери 53bp1 спасает колонии формирования в ctip обедненный mcf7 клетки после обращения с olaparib PARP.на ценности являются средние значения ± SEM от трех независимых экспериментов.для эффективности в нк, sictip, si53bp1, и sictip / 53bp1 было 95 ± 2%, 80 ± 2%, 46 ± 3%, а 50 ± 4%.
ctip потери, является увеличение PARP чувствительность in vivo