Figure 2: Loss of CtIP causes HRR d

Figure 2: Loss of CtIP causes HRR deficiency. A. Western blot analysis of CtIP in whole cell extracts from MCF7 cells transfected with CtIP or control siRNA (25 nM) for 48 hrs. B. The images of γH2AX foci after 4 Gy IR in control (NC) and CtIP-depleted MCF7 cells at different time points as indicated. Scale bar, 40 μm. C. Quantification of γH2AX foci in Figure 2B. Numbers of γH2AX foci were quantified from triplicated experiments (>50 cells at each condition) and are shown as mean values ± SEM. Statistical significance was calculated by one-way analysis of variance (ANOVA). ( * for P

Результаты (русский) 1:

Рисунок 2: Потеря CtIP вызывает HRR дефицит. A. Западный анализ помаркой по CtIP в клеточных экстрактов из MCF7 клеток transfected с CtIP или управления малых интерферирующих РНК (25 Нм) за 48 часов. B. изображения очагов γH2AX после 4 Gy ИК контроля (НК) и CtIP обедненного MCF7 клетки в разное время точки как указано. Линейки, 40 мкм. C. количественного определения очагов γH2AX на рисунке 2B. Число очагов γH2AX были количественно из triplicated экспериментов (> 50 клеток на каждое условие) и представлены как средние значения ± SEM. статистической значимости был рассчитан путем односторонний дисперсионный анализ (ANOVA). (* для P < 0,05; ** для P < 0.01; где не указано, значение P была равна или превышает 0,05). D. одичал тип и обедненного CtIP MCF7 клетки были облучены (4 гр) и фиксированной 3 часа позже. Rad51 и γH2AX очагов были immunodetected с анти Rad51 и анти γH2AX антител, соответственно. Клеточных ядер были counterstained с DAPI. Линейки, 10 мкм. Е. Количественная оценка очагов Rad51 в 2D рис. были рассчитаны 50 клеток на каждое условие. Средний ± SEM. Statisitcal значение, ** для P < 0.01.Потеря CtIP заставляет клетки быть чувствительным к ПАРП ингибиторыПотому что CtIP истощенных клеток показывают HRR дефекта, они должны быть более чувствительны к битор PARP. Здесь мы использовали две клинически ПАРП ингибиторов olaparib и veliparib для изучения этой точки. Результаты показали, что клетки истощены CtIP MCF7 действительно выставлены значительно увеличили повреждения ДНК после лечения ингибиторами этих PARP (рис. 3A, 3B и дополнительные рис. 3A и B), который согласуется с недавнего исследования в клетках рака яичников [32]. Когда мы проанализировали жизнеспособность клеток после лечения с olaparib и veliparib, CtIP истощенных клеток показали жизнеспособность клеток снизилась с МТТ assay (рис. 3 c) и в колонии формирования assay (рис. 3D), который был похож на BRCA1 несовершенным клеток (рис. Дополнительное 3D и E) [7, 33]. Было сообщено, что в BRCA1 несовершенным раковых клеток, потеря 53BP1 приводит к сопротивлению АБС битор PARP [34, 35], поэтому мы проверили ли потеря 53BP1 также может вызвать сопротивление АБС битор PARP в исчерпаны CtIP клеток. Как показано на рис. 3E и 3F, мы обнаружили, что потеря 53BP1 сам приводит к сенсибилизации к АБС битор PARP и потеря CtIP заставляет клетки очень чувствительны к АБС битор PARP, однако, двойной потери 53BP1 и CtIP может привести к сопротивление АБС битор PARP, по сравнению с потерей CtIP. Это наблюдение таким образом подкрепляет вывод, что потери CtIP связан с чувствительностью к ПАРП ингибирование.

Результаты (русский) 3:

рис. 2: потеря ctip причин hrr недостатки.а. западной пятном анализ ctip в целом камеру выдержки из mcf7 клетки transfected с ctip или контроля sirna (25 нм) на 48 часов.в. образы гамма h2ax очагов после 4 гр ик - контроль (нк) и ctip обедненный mcf7 клеток в разное время моменты, как указано.масштаб, 40 мкм. с. количественная оценка гамма h2ax очагов в диаграмма 2в.количество гамма h2ax очага были количественно из triplicated экспериментов (> 50 камер на каждом состоянии) и показали, как средние значения ± мдж.статистическая значимость рассчитывается путем одностороннего анализа разница (результаты да).(* p < 0,05; * * п < 0,01; если не указано, что P стоимость равна или превышает 0,05).D. Wild типа и ctip обедненный mcf7 клетки были облучены (4 гр) и установил 3 часа позже.rad51 и γ h2ax очага были immunodetected с anti-rad51 и анти - гамма h2ax антитела, соответственно.ячейка ядра были counterstained с dapi.масштаб, 10 мкм. е. количественная оценка rad51 очагов на 2D. 50 камер на каждом условии рассчитывались.имею в виду ± мдж.statisitcal значение, * * п < 0,01.
потери ctip причин клетки относиться к ингибиторам PARP.потому что ctip обедненный клетки показывают, hrr дефект, ожидается, что они будут более чувствительными к ингибиторам PARP.здесь мы использовали два клинически используется ингибиторы PARP olaparib и veliparib рассмотреть этот вопрос.результат показал, что ctip обедненный mcf7 клетки действительно была значительно увеличить повреждение днк после лечения этих ингибиторы PARP (рис. 3, 3b и дополнительных. 3а и b),что соответствует последние исследования в рак яичников клеток [32].когда мы анализировали жизнеспособность клеток после обращения с olaparib и veliparib, ctip обедненный клетки показали сократилось жизнеспособность клеток с мтт пробы (рис. 3) и создание в колонии пробы (диаграмма 3D), который был похож на BRCA1 недостатки клеток (дополнительные диаграмма 3D и e) [33] 7.сообщалось, что в BRCA1 недостатки раковых клеток, потери 53bp1 приводит к PARP сопротивления [34,35], поэтому мы проверили ли потеря 53bp1 также могут вызвать PARP сопротивления в ctip обедненный клеток.как показано на диаграмме 3 и 3F, мы обнаружили, что потери 53bp1 себя ведет к информированности PARP,и потеря ctip причин клетки весьма чувствительны к PARP, однако две потери 53bp1 и ctip может вызвать сопротивление PARP по сравнению с потерей ctip.это замечание, таким образом, подтверждает вывод о том, что потери ctip связано с реакцией на торможение PARP.